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    探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

    探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

    產品時間:2020-12-21

    訪問量:266

    廠商性質:經銷商

    生產地址:進口、國產

    簡要描述:
    探針法熒光定量PCR檢測試劑盒運輸條件:低溫運輸,用干冰或者冰袋低溫運輸。待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等等。
    品牌其他品牌CAS詳見說明書
    分子式詳見說明書純度詳見說明書
    分子量詳見說明書貨號GOY-H6721
    規格50次供貨周期現貨
    主要用途公司產品僅用于科研應用領域化工



    準備試劑與收集血樣:
    1.  收集標本:產品僅用于科研血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20   ℃或 -70   ℃ )保存,避免反復凍融。
    2.  標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
    3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
    4.  洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
    檢測程序:
    1.  加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
    2.  洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
    3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
    4.  洗板:同前。
    5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
    6.  洗板:同前。
    7.  每孔加入底物工作液100ul ,置 37   ℃ 暗處反應15 分鐘。
    8.  每孔加入100ul 終止液混勻。
    9.  30分鐘內用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。
    性能:
    1. 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900。
    2. 靈敏度:檢測濃度小于0.1 U/mL。
    3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
    4. 重復性:板內、板間變異系數均小于15%。
    5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
    6. 有效期:6個月
    使用方法:
    ?探針法熒光定量PCR檢測試劑盒測定法的靈敏度來自作為報告的酶。*,酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導大量的催化反應,產生可供觀察的顯色反應現象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
    1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。   24μg/ml    5號標準品    150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
     12μg/ml    4號標準品    150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
     6μg/ml     3號標準品    150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
     3μg/ml     2號標準品    150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
     1.5μg/ml   1號標準品    150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
    2. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。|
    3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
    4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
    6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
    7. 溫育:操作同3。
    8. 洗滌:操作同5。
    9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
    10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
    11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
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     實驗規則:

    1、要保證移液槍的準確性,誤差不能超過2%??捎盟碗娮犹炱竭M行確定。但有專業人員進行矯正。
    2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標準品時。
    3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復到室溫,以使結果更穩定。
    4、實驗時,要使底物避光保存。
    5、用槍吸取液體時速度不能太快,以免產生氣泡而使吸取量不準確。
    6、吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
    7、將液體加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。
    探針法熒光定量PCR檢測試劑盒8、液體全部加完后,可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。
    9、應盡量做雙孔實驗,這樣才能保證數據的準確性。
    10、對結果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。

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