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    人前脂肪細胞說明書

    人前脂肪細胞說明書

    產品時間:2020-07-16

    訪問量:149

    廠商性質:經銷商

    生產地址:進口、國產

    簡要描述:
    人前脂肪細胞說明書在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
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    分子量詳見說明書貨號GOY-Y3298
    規格5×105/瓶供貨周期現貨
    主要用途公司產品僅用于科研應用領域化工

    以下是訂購信息:

    產品名稱英文名稱貨號
     人前脂肪細胞說明書 Human Adipose: Preadipocytes GOY-Y3298

    人前脂肪細胞【Human Adipose: Preadipocytes
         產品描述:公司提供的原代細胞均來自新鮮組織,公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織,用于培養該細胞的組織采集是根據標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩定。在公司生物技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態,進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。產品僅供科研
     冷凍保存細胞之方法?
    冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
    冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

     

    培養操作:
    1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
    2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。      
    1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
    2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。  
    3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
    4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
    3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
    1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
    3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
    細胞培養操作規程:
    一.培養基及培養凍存條件準備:
    1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
    2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
    3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
    二.細胞處理:
    1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
    2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
    對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
    方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
    下列是公司正在促銷產品:

    豬肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Stigmasta-4,22,25-trien-3-one  中文名:  分子式:C29H44O 

    豬端粒酶(TE)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Sulfaquinoxaline  59-40-5  中文名:磺胺喹噁啉  分子式:C14H12N4O2S  度:98.0%  關鍵詞: 

    豬端粒酶(TE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tanshinone I  中文名:  分子式:C18H12O3  度:96.0%

    豬凋亡相關因子elisa試劑盒   豬凋亡相關因子試劑盒   規格型號:96T/48T   豬凋亡相關因子試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產品別名:豬凋亡相關因子試劑盒、豬凋亡相關因子eisa試劑盒   保存條件:2-8   保質期:6個月。  Tanshinone IIA  中文名:丹參酮IIA  分子式:C19H18O3  度:98.5%

    豬凋亡相關因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Sulfaquinoxaline  59-40-5  中文名:磺胺喹噁啉  分子式:C14H12N4O2S

    小鼠蘋果酸酶   英文名稱:   Mouse Malic Enzyme   規格:   48T/96T   英文縮寫:   ME  Diphenhydramine   147-24-0  中文名:鹽酸苯海拉明  分子式:C17H22ClNO 

    小鼠皮質醇elisa試劑盒   小鼠皮質醇試劑盒   規格型號:96T/48T   小鼠皮質醇試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產品別名:小鼠皮質醇試劑盒、小鼠皮質醇elisa試劑盒   保存條件:2-8   保質期:6個月。  Ganciclovir  中文名:更昔洛韋  分子式:C9H13N5O4  度:98.0%

    小鼠皮質醇(Coisol)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Citreorosein  481-73-2  中文名:ω-羥基大黃素  分子式:C15H10O6 

    小鼠皮質/上腺(CO)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Gefitinib  184475-35-2  中文名:吉非替尼  分子式:C22H24ClFN4O3 

    小鼠皮質(mouse Coicosterone)   作用:   ELISA   規格:   48T/96T   進口分裝  Benzoin methyl ether  3524-62-7  中文名:安息香甲基醚  分子式:C15H14O2

    細菌營養肉湯500毫升  2-Acetamidothiazole  2719-23-5  中文名:2-乙酰氨基噻唑  分子式:C5H6N2OS  度:99.0%  關鍵詞: 

    細菌營養瓊脂平板50  2-Acetyl-3-ethylpyrazine  32974-92-8  中文名:2-乙?;?/span>-3-乙基吡嗪  分子式:C8H10N2O  度:99.0%  關鍵詞: 

    細菌印度墨負性染色試劑盒50  2-Acetylfluorene  781-73-7  中文名:2-乙酰芴  分子式:C15H12O  度:98.0%  關鍵詞: 

    細菌異化型鹽還原酶活性比色法定量檢測試劑盒20  2-Amino-2'-chloro-5-nitro benzophenone  2011-66-7  中文名:2-氨基-5-硝基-2'-氯二苯甲酮  分子式:C13H9ClN2O3  度:98.0%  關鍵詞: 

    細菌乙酰甲基原醇V-P檢測試劑盒20  2-Amino-3-chloro-1,4-naphthoquinone  2797-51-5  中文名:2-氨基-3--1,4-萘醌  分子式:C10H6ClNO2  度:99.0%  關鍵詞:

    人視黃醇結合蛋白4(RBP-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Thiamphenicol  15318-45-3  中文名:甲砜霉素  分子式:C12H15Cl2NO5S 

    人生長激素受體(GHR)酶聯吸附測定試劑盒   Human GHR (Growth Hormone Receptor) ELISA Kit                  3,5-Di-O-caffeoylquinic acid  中文名:異綠原酸分子式:C25H24O12 

    人三0酸鳥苷環水解酶1   英文名稱:   Human Guanosine 5-iphosphate Cyclohydrolase 1   規格:   48T/96T   英文縮寫:   GCH1  3-O-Acetylandrostenone hydrazone  中文名:3-O-乙?;弁?/span>  分子式:C21H32N2O2 

    人乳酸脫氫酶   英文名稱:   Human Lactate Dehydrogenase   規格:   48T/96T   英文縮寫:   LDH  3-Acetyl-2,5-dichlorothiophene  36157-40-1  中文名:  分子式:C6H4Cl2OS 

    人溶菌酶   英文名稱:   lysozyme   規格:   48T/96T   英文縮寫:   LZM/LYS  3-[4-[(2-Chloro-5-iodophenyl)methyl]phenoxy]tetrahydro-furan  中文名:  分子式:C17H16ClIO2  度:98.0%

    實驗報告:

    人前脂肪細胞說明書一、分離與培養:
        1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將組織剪成1mm3左右大??;
        2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
        3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織完全被消化;
        4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
        5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
    二、免疫熒光鑒定:
        1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
        2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
        3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
        4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
        5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
        6、用PBS沖洗3次,每次10min,后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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