人牙周膜成纖維細胞培養

人牙周膜成纖維細胞【Human Periodontal Ligament: Normal Fibroblasts】
       產品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養該細胞的組織采集是根據標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質量的穩定。在公司生物技術部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態，進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。原代細胞分離：
產品僅供科研一、細胞培養
1取材 在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）后接入培養器血中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的*培養稱為原代培養。2培養 將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。3凍存及復蘇（可參閱后面有關章節）為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度－196℃，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養基，以一定的冷卻速度凍存，終保存于液氮中。在極低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的。復蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內迅速融解。然后將細胞轉入培養器皿中進行培養。
二、原代細胞分離
凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經特殊分離方法制備而來的原初培養的細胞稱之為原代細胞。1懸浮細胞的分離方法組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據需要收獲目的細胞。2實體組織材料的分離方法對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。
三、細胞增殖檢測技術
目前主要有兩種用于檢測細胞增殖能力的方法。一種是直接的方法，通過直接測定進行分裂的細胞數來評價細胞的增殖能力。另一種是間接的方法，即細胞活力（cell viability）檢測方法，通過檢測樣品中健康細胞的數目來評價細胞的增殖能力。顯然，細胞活力檢測法并不能終證明檢測樣品中的細胞是否在增殖。如細胞在某一培養條件下會自發啟動凋亡程序，但藥物的干擾可抑制凋亡的發生；這時若采用細胞活力檢測法，顯然可以區分兩種條件下的細胞數量，但我們并不能從藥物干擾組細胞數大于對照組的事實說明藥物可促進細胞增殖的結論。所以直接的證據應該采用方法一。其中常見檢測：CCK8檢測法 ，MTT檢測法，Brdu檢測法，Edu檢測法，平板克隆形成。
四、細胞周期檢測技術細胞周期指由細胞分裂結束到下一次細胞分裂結束所經歷的過程，所需的時間叫細胞周期時間。常用的方法：流式檢測細胞周期，標記有絲分裂百分率法。
五、細胞凋亡檢測常見檢測方法：流式檢測細胞凋亡，線粒體膜電位，活性氧檢測，Hoechst染色，電鏡，TUNEL。
六、細胞轉移能力檢測常見檢測方法：細胞劃痕實驗，Transwell實驗，Invasion實驗

細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。

豬睪(T)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Sulfamethoxazole  中文名：磺胺甲噁唑  分子式：C10H11N3O3S  度：98.0%

豬睪(T)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Sucrose  57-50-1  中文名：  分子式：C12H22O11  度：%  關鍵詞：  中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

豬高鐵血紅蛋白(MHB)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Sulfamethoxazole  中文名：磺胺甲噁唑  分子式：C10H11N3O3S 

豬剛地弓形蟲(T.gondii)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Sulfamethoxazole  723-46-6  中文名：磺胺甲噁唑  分子式：C10H11N3O3S  度：98.0%  關鍵詞： 

豬干擾素-γelisa試劑盒   豬干擾素-γ試劑盒   規格型號：96T/48T   豬干擾素-γ試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：豬干擾素-γ試劑盒、豬干擾素-γeisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  Sulfamonomethoxine  中文名：磺胺間甲氧嘧啶  分子式：C11H12N4O3S  度：98.0%

小鼠遷移率族蛋白B1（HMGB-1）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Gimeracil  103766-25-2  中文名：吉莫斯特  分子式：C5H4ClNO2 

小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽elisa試劑盒   小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽試劑盒   規格型號：96T/48T   小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽試劑盒、小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  Ginsenoyne K  141947-42-4  中文名：  分子式：C17H24O3  度：%  關鍵詞： 

小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              N-Benzoyl-(2R,3S)-3-phenylisoserine  132201-33-3  中文名：  分子式：C16H15NO4 

小鼠葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Gefitinib  中文名：吉非替尼  分子式：C22H24ClFN4O3  度：98.0%

小鼠葡萄糖氧化酶   英文名稱：   Mouse Glucose Oxidase   規格：   48T/96T   英文縮寫：   GOD  Cleroindicin F  189264-47-9  中文名：  分子式：C8H10O3

蝦特定基因序列(FC)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Aspergillon A  2239299-08-0  中文名：  分子式：C22H32O  度：98.0%  關鍵詞： 

蝦特定基因序列(FC)核酸檢測試劑盒   48T  Aspergillon A  2239299-08-0  中文名：  分子式：C22H32O 

蝦胺/酚   英文名稱：   Octopamine   規格：   48T/96T   英文縮寫：   OPM  Aspartame  22839-47-0  中文名：阿司帕坦  分子式：C14H18N2O5  度：98.0%  關鍵詞： 

細小病毒(PPV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Artesunate  88495-63-0  中文名：青蒿琥酯  分子式：C19H28O8  度：98.0%  關鍵詞： 

細小病毒(PPV)核酸檢測試劑盒   48T  Artesunate  88495-63-0  中文名：青蒿琥酯  分子式：C19H28O8

人特異生長因子/相關因子(TSGF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              2-Chloromethyl-3-methyl-4-(2,2,2-trifluoroethoxy)pyridine   中文名：  分子式：C9H10Cl2F3NO 

人糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              2-Benzoylbenzoic acid  中文名：2-苯甲酰苯甲酸  分子式：C14H10O3 

人糖原0酸化酶同工酶II(GP-II)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  2-Benzoylbenzoic acid  中文名：2-苯甲酰苯甲酸  分子式：C14H10O3  度：98.0%

人胎兒血紅蛋白elisa試劑盒   人胎兒血紅蛋白試劑盒   規格型號：96T/48T   人胎兒血紅蛋白試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：人胎兒血紅蛋白試劑盒、人胎兒血紅蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。     Afatinib  中文名：阿法替尼  分子式：C24H25ClFN5O3 

人牙周膜成纖維細胞培養人髓樣分化因子初次應答基因88elisa試劑盒   人髓樣分化因子初次應答基因88試劑盒   規格型號：96T/48T   人髓樣分化因子初次應答基因88試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：人髓樣分化因子初次應答基因88試劑盒、人髓樣分化因子初次應答基因88 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  2-Chloro-1-(5'-(prop-1-ynyl)-2,2'-bithiophen-5-yl)ethanol  中文名：  分子式：C13H11ClOS2  度：98.5%