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    成人皮膚成纖維細胞培養

    成人皮膚成纖維細胞培養

    產品時間:2020-07-16

    訪問量:149

    廠商性質:經銷商

    生產地址:進口、國產

    簡要描述:
    成人皮膚成纖維細胞培養在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
    品牌其他品牌CAS詳見說明書
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    分子量詳見說明書貨號GOY-Y3292
    規格5×105/瓶供貨周期現貨
    主要用途公司產品僅用于科研應用領域化工

    以下是訂購信息:

    產品名稱英文名稱貨號
     成人皮膚成纖維細胞培養 Human Skin: Normal Dermal Fibroblasts GOY-Y3292

    成人皮膚成纖維細胞【Human Skin: Normal Dermal Fibroblasts
         產品描述:公司提供的原代細胞均來自新鮮組織,公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織,用于培養該細胞的組織采集是根據標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩定。在公司生物技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態,進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。產品僅供科研
     冷凍保存細胞之方法?
    冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
    冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

     

    培養操作:
    1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
    2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。      
    1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
    2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。  
    3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
    4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
    3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
    1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
    3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
    細胞培養操作規程:
    一.培養基及培養凍存條件準備:
    1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
    2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
    3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
    二.細胞處理:
    1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
    2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
    對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
    方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
    下列是公司正在促銷產品:

    豬基質金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Sucrose  中文名:  分子式:C12H22O11  度:%

    豬基質金屬蛋白酶9elisa試劑盒   豬基質金屬蛋白酶9試劑盒   規格型號:96T/48T   豬基質金屬蛋白酶9試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產品別名:豬基質金屬蛋白酶9試劑盒、豬基質金屬蛋白酶9eisa試劑盒   保存條件:2-8   保質期:6個月。  Sulfaclozine  中文名:磺胺氯吡嗪  分子式:C10H9ClN4O2S  度:99.0%

    豬基質金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Succinic acid  中文名:  分子式:C4H6O4 

    豬基質金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Sucrose  中文名:  分子式:C12H22O11 

    豬肌球蛋白輕鏈0酸酶(MLCPELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Succinic acid  110-15-6  中文名:  分子式:C4H6O4  度:關鍵詞:  增香劑; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

    小鼠羥脯酸elisa試劑盒   小鼠羥脯酸試劑盒   規格型號:96T/48T   小鼠羥脯酸試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產品別名:小鼠羥脯酸試劑盒、小鼠羥脯酸eisa試劑盒   保存條件:2-8   保質期:6個月。  Mannitol  69-65-8  中文名:甘露醇  分子式:C6H14O6  度:98.5%  關鍵詞:  利尿劑; 脫水劑; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

    小鼠羥脯酸(mouse HYP)   作用:   ELISA   規格:   48T/96T   進口分裝  Neochlorogenic acid  906-33-2  中文名:新綠原酸  分子式:C16H18O9  度:98.0%  關鍵詞:  抗艾滋病病毒; 抗病毒; 保肝; 莽草酸; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

    小鼠羥脯酸(Hyp)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Gliclazide  中文名:格列齊特  分子式:C15H21N3O3S  度:98.0%

    小鼠羥脯酸(Hyp)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Benzoin oxime  中文名:安息香肟  分子式:C14H13NO2  度:98.0%

    小鼠羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶   英文名稱:   Mouse 3-hydroxy-3-methylglaryl CoA reductase   規格:   48T/96T   英文縮寫:   HMG-CoA  Daturataturin A  133360-51-7  中文名:  分子式:C34H48O10

    線粒體復合物V蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25  2-[(6-Chloro-3,4-dihydro-3-methyl-2,4-dioxo-1(2H)-pyrimidinyl)methyl]benzonitrile  865758-96-9  中文名:  分子式:C13H10ClN3O2  度:98.0%  關鍵詞: 

    線粒體復合物I蛋白共沉淀分析試劑盒5  2-[(Acetylthio)methyl]-phenylpropionic acid  中文名:  分子式:C12H14O3S  度:98.0%

    線粒體復合物I蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25  22-Dehydroclerosteryl acetate  中文名:  分子式:C31H48O2  度:93.0%

    線粒體復合物IV蛋白共沉淀分析試劑盒5  2-Acetonaphthone  中文名:2'-萘乙酮  分子式:C12H10O  度:98.0%

    線粒體復合物IV蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25  2-Allylphenol  中文名:2-烯丙基酚  分子式:C9H10O  度:98.0%

    人內皮細胞生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              2-Amino-9H-fluoren-9-one  中文名:2-氨基-9H--9-  分子式:C13H9NO 

    人緊張素原elisa試劑盒   人緊張素原試劑盒   規格型號:96T/48T   人緊張素原試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產品別名:人緊張素原試劑盒、人緊張素原eisa試劑盒   保存條件:2-8   保質期:6個月。     9-Hydroxy-α-lapachone  中文名:  分子式:C15H14O4 

    人緊張素Ⅱ受體2(AT2R)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tiagabine   145821-59-6  中文名:鹽酸噻加賓  分子式:C20H26ClNO2S2  度:98.0%  關鍵詞: 

    人緊張素Ⅱ受體1(ANGR-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Tiagabine   145821-59-6  中文名:鹽酸噻加賓  分子式:C20H26ClNO2S2 

    人星狀病毒(HastV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Withaphysalin A  中文名:  分子式:C28H34O6

    實驗報告:

    一、分離與培養:
        1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將組織剪成1mm3左右大??;
        2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
        3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織完全被消化;
        4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
        5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
    成人皮膚成纖維細胞培養二、免疫熒光鑒定:
        1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
        2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
        3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
        4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
        5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
        6、用PBS沖洗3次,每次10min,后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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