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    人晶狀體上皮細胞保存

    人晶狀體上皮細胞保存

    產品時間:2020-07-16

    訪問量:116

    廠商性質:經銷商

    生產地址:進口、國產

    簡要描述:
    保存和應用:客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到人晶狀體上皮細胞保存后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h,再進行后續的實驗操作。
    品牌其他品牌CAS詳見說明書
    分子式詳見說明書純度詳見說明書
    分子量詳見說明書貨號GOY-Y3289
    規格5×105/瓶供貨周期現貨
    主要用途公司產品僅用于科研應用領域化工

    人晶狀體上皮細胞【Human Eyes: Normal Lens Epithelial Cells
           產品描述:公司提供的原代細胞均來自新鮮組織,公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織,用于培養該細胞的組織采集是根據標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩定。在公司生物技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態,進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。

    產品名稱人晶狀體上皮細胞保存
    英文名稱 Human Eyes: Normal Lens Epithelial Cells
    貨號 GOY-Y3289

    原代細胞分離:
    一、細胞培養產品僅供科研
    1取材 在無菌環境下從機體取出某種組織細胞(視實驗目的而定),經過一定的處理(如消化分散細胞、分離等)后接入培養器血中,這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的*培養稱為原代培養。2培養 將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。3凍存及復蘇(可參閱后面有關章節)為了保存細胞,特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株,要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃,將細胞收集至凍存管中加入含保護劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養基,以一定的冷卻速度凍存,終保存于液氮中。在極低的溫度下,細胞保存的時間幾乎是無限的。復蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37℃水中,使之在一分鐘內迅速融解。然后將細胞轉入培養器皿中進行培養。
    二、原代細胞分離
    凡是來源于胚胎、組織器官及外周血,經特殊分離方法制備而來的原初培養的細胞稱之為原代細胞。1懸浮細胞的分離方法組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據需要收獲目的細胞。2實體組織材料的分離方法對于實體組織材料,由于細胞間結合緊密,為了使組織中的細胞充分分散,形成細胞懸液,可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。
    三、細胞增殖檢測技術
    目前主要有兩種用于檢測細胞增殖能力的方法。一種是直接的方法,通過直接測定進行分裂的細胞數來評價細胞的增殖能力。另一種是間接的方法,即細胞活力(cell viability)檢測方法,通過檢測樣品中健康細胞的數目來評價細胞的增殖能力。顯然,細胞活力檢測法并不能終證明檢測樣品中的細胞是否在增殖。如細胞在某一培養條件下會自發啟動凋亡程序,但藥物的干擾可抑制凋亡的發生;這時若采用細胞活力檢測法,顯然可以區分兩種條件下的細胞數量,但我們并不能從藥物干擾組細胞數大于對照組的事實說明藥物可促進細胞增殖的結論。所以直接的證據應該采用方法一。其中常見檢測:CCK8檢測法 ,MTT檢測法,Brdu檢測法,Edu檢測法,平板克隆形成。
    四、細胞周期檢測技術細胞周期指由細胞分裂結束到下一次細胞分裂結束所經歷的過程,所需的時間叫細胞周期時間。常用的方法:流式檢測細胞周期,標記有絲分裂百分率法。
    五、細胞凋亡檢測常見檢測方法:流式檢測細胞凋亡,線粒體膜電位,活性氧檢測,Hoechst染色,電鏡,TUNEL。
    六、細胞轉移能力檢測常見檢測方法:細胞劃痕實驗,Transwell實驗,Invasion實驗

    細胞培養方法:
    1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
    ①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
    ②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化;
    ③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止;
    ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
    ⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基;
    ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
    2、細胞復蘇:
    ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養基混勻。
    ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。
    3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
    ①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
    ②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化;
    ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
    ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
     

    豬可溶性內皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Taxilluside A  1661914-46-0  中文名:  分子式:C18H24O10 

    豬可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Stigmastane-3β,5α,6β-triol  20835-91-0  中文名:豆甾-3β,5α,6β-三醇  分子式:C29H52O3  度:96.5%  關鍵詞:  甘蔗; 分株紫萁; 豆甾烷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

    豬可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Sorafenib tosylate  475207-59-1  中文名:索拉非尼  分子式:C28H24ClF3N4O6S 

    豬可溶性P選擇素(sP-Selectin)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Stigmastane-3β,5α,6β-triol  20835-91-0  中文名:豆甾-3β,5α,6β-三醇  分子式:C29H52O3 

    豬可溶性P選擇素(sP-Selectin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Stigmasterol  中文名:豆甾醇  分子式:C29H48O

    小鼠熱休克蛋白40(Hsp-40)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Glycerol  中文名:甘油  分子式:C3H8O3  度:%

    小鼠熱休克蛋白40(Hsp-40)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Glycerol 1-(26-hydroxyhexacosanoate)  177602-14-1  中文名:  分子式:C29H58O5 

    小鼠熱休克蛋白27(HSP-27)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Glycerol  中文名:甘油  分子式:C3H8O3 

    小鼠熱休克蛋白20(Hsp-20)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Glycerol  56-81-5  中文名:甘油  分子式:C3H8O3  度:關鍵詞: 

    小鼠缺血修飾白蛋白elisa試劑盒   小鼠缺血修飾白蛋白試劑盒   規格型號:96T/48T   小鼠缺血修飾白蛋白試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產品別名:小鼠缺血修飾白蛋白試劑盒、小鼠缺血修飾白蛋白elisa試劑盒   保存條件:2-8   保質期:6個月。  Glyceryl hexacosanoate  127098-14-0  中文名:  分子式:C29H58O4  度:關鍵詞:

    小量瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒   Small agarose gel DNA recycling Kit  Azathioprine  446-86-6  中文名:硫唑嘌呤  分子式:C9H7N7O2S 

    小量DNA產物化試劑盒   Small DNA product purification kit  Azathioprine  446-86-6  中文名:硫唑嘌呤  分子式:C9H7N7O2S  度:98.0%  關鍵詞: 

    香草   25g  Propafenone   34183-22-7  中文名:鹽酸普羅帕酮  分子式:C21H28ClNO3  度:98.0%  關鍵詞: 

    腺苷脫酶(ADA)檢測   Salivary acid (SA) detection  Axitinib  319460-85-0  中文名:阿西替尼  分子式:C22H18N4OS  度:98.0%   

    線粒體檸檬酸(MCA)含量測試盒   紫外分光光度法   50/48  Averantin  5803-62-3  中文名:  分子式:C20H20O7  度:關鍵詞:

    人乙脫氫酶elisa試劑盒   人乙脫氫酶試劑盒   規格型號:96T/48T   人乙脫氫酶試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產品別名:人乙脫氫酶試劑盒、人乙脫氫酶elisa試劑盒   保存條件:2-8   保質期:6個月。  3-(Bromomethyl)-2-cyclopropyl-4-(4'-fluorophenyl)quinoline  154057-56-4  中文名:  分子式:C19H15BrFN 

    人胰島素原(PI)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tiamulin  55297-95-5  中文名:泰妙菌素  分子式:C28H47NO4S  度:98.0%   

    人胰島素受體β(ISR-β)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Tiamulin  55297-95-5  中文名:泰妙菌素  分子式:C28H47NO4S 

    人氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Timosaponin AIII  41059-79-4  中文名:知母皂苷AIII  分子式:C39H64O13 

    人血小板生成素(TPO)酶聯吸附測定試劑盒   Human TPO (Thrombopoietin) ELISA Kit  2-Naphthyl N-benzoylphenylalaninate  15873-25-3  中文名:2-萘基N-苯甲?;奖彼狨?/span>  分子式:C26H21NO3

    人晶狀體上皮細胞保存操作步驟:

    1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
    2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
    3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
    4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
    5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
    6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
    7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
    8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
    9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
    10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
    11. 鏡檢觀察。

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